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Plateforme Culture cellulaire

Molecular Biology and viral production


Contact plateforme : CellCult-MIRCen@cea.fr

Publié le 4 mai 2023

​Activités

La plateforme de culture cellulaire est organisée autour de deux laboratoires de niveau L2 dédiés avec des activités différentes :

  • un laboratoire dédié aux cultures primaires et lignées cellulaires. Il comprend trois pièces dont une mise à disposition spécifiquement pour les cultures primaires qui sont plus fragiles, et qui sont à risque vis-à-vis des contaminations par les cellules de lignées, mais qui sont aussi potentiellement vecteur de contamination (cultures à partir de tissu animal).

Le laboratoire de cultures primaires et lignées est adapté à l'utilisation de vecteurs viraux et comporte des incubateurs et éléments de sécurité dédiés à cet effet. 

CC 2023.jpg

Laboratoire de niveau L2 (®CEA)


  • un laboratoire dédié aux cultures de cellules souches pluripotentes humaines (iPSC) et de primate non humain et à leurs dérivés. Il comprend trois pièces dont une mise à disposition spécifiquement pour les activités d’amplification, de différenciation et de mise en banque de cellules iPS. La cryopréservation des iPSC et leurs dérivés est assurée.

L'expertise de la plateforme inclut : la différenciation neuronale (neurones corticaux, striataux) et gliale (astrocytes) des cellules iPS (humaines et de primate), la mise en banque en masse de progéniteurs neuraux ou gliaux (pour la modélisation pathologique ou la thérapie cellulaire), la miniaturisation des cultures et analyses (microplaque 96/384), les co-cultures neurone-glie, la production de sphéroides neuraux, la modélisation cellulaire de maladies neurodégénératives dont la maladie de Huntington et les synucléinopathies et l'imagerie calcique de l'activité synaptique de neurones individuels ou de réseaux neuronaux.


​Equipements

Laboratoire de culture cellulaire L2 dédié aux cultures primaires et lignées immortalisées :

En confinement dynamique (3 pièces en dépression + 1 sas d'entrée en surpression).

  • 3 Poste de Sécurité Microbiologique pour la culture cellulaire
  • 5 incubateurs (dont deux dédiés aux cellules traitées avec des vecteurs viraux)
  • Cytomètre
  • 1 compteur de cellules
  • 2 loupes binoculaires
  • Microscopes inversés pour l'observation en contraste de phase et épifluorescence (2)
  • 1 PSM (Poste de Sécurité Microbiologique) dédié à la sonication de tissus humain ou animaux
  • Centrifugeuses réfrigérées à cellules (2)
  • Petit congélateur -80°C pour le stockage temporaire de vecteurs viraux

Laboratoire de culture cellulaire dédié aux cellules souches pluripotentes :

En confinement dynamique (2 pièces de culture, 1 pièce d'analyses fonctionnelles et une pièce de circulation en dépression + 1 sas d'entrée en surpression).

  • 8 PSM
  • 6 incubateurs
  • Agitateur intra incubateur pour organoïdes et sphéroïdes
  • Electroporteur de cellules Neon (genome editing Cas9)
  • Congélateur -80°C pour le stockage notamment des chimiothèques

En accès sous condition, équipements d'analyses cellulaires fonctionnelles sur cellules fixées ou vivantes (Live Imaging) de la plateforme « Neurolead » fruit de la collaboration de MIRCen, du Collège de France et Theranexus dans le cadre du projet BPIFrance « NeuroLEAD »

  • Système de microscopie automatisé (2)
  • Système de lecture cinétique à haut débit pour l'imagerie cellulaire fluorescente.  
  • Cytomètre de flux
  • Automate de pipetage
  • Microscopes inversé pour l'observation en contraste de phase et epifluorescence (2)

 

Biobanque commune aux deux laboratoires (hors L2)

CC2023 récipients.png

Récipients cryogéniques non pressurisés : RCB600 permettant le stockage de ~25 000 cryotubes de cellules congelées à -150°C (azote gazeux) sous alarme. Réservoir « nourrice » d'azote liquide pressurisé de 230 Litre connecté à la cuve RCB600. L'autonomie du système RCB600-Nourrice est d'environ 3 semaines.