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Plateforme de microscopie à feuillet de lumière

Plateforme de microscopie à feuillet de lumière UltraMicroscope 

CEA-SEPIA/Sup'Biotech

Publié le 21 octobre 2020
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​La plateforme de microscopie à feuillet de lumière est localisée au sein du laboratoire partenarial CEA-SEPIA/Sup’Biotech-Celltechs, sur le site du CEA de Fontenay-aux-Roses.

Cette plateforme met à disposition un UltraMicroscope II LaVision Biotec pour tout laboratoire CEA ou non CEA désirant utiliser la microscopie à feuillet de lumière dans le cadre d’un projet de recherche. La plateforme propose également des formations professionnelles.

Tous les nouveaux utilisateurs devront se faire connaître auprès des personnes en charge de la plateforme  afin d'être au mieux orientés et conseillés​. L'autorisation d'accès au calendrier de réservation est conditionnée par le suivi d'une formation obligatoire.

Contacts plateforme :

​Applications et projets

L'UltraMicroscope II est optimal pour l'imagerie d'échantillons biologiques épais, préalablement clarifiés :

  • Organes entiers de petits animaux,
  • Prélèvements de tissus animaux ou végétaux,
  • Embryons,
  • Organoïdes.

Au sein du laboratoire, l'UltraMicroscope II est régulièrement utilisé pour l'imagerie d'organoïdes cérébraux et de cerveaux de souris. Il a également été utilisé avec succès pour imager une grande variété d'échantillons : autres organes et embryons de souris, tissu osseux, échantillons végétaux, sphéroïdes cellulaires…

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Cerveau de souris : marquage de la vasculature par injection de DilC18(3) - clarification Scale/CUBIC
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Organoïde cérébral : marquage IF des neurones par un anticorps anti-β3-tubuline - clarification ECI
​Embryon de souris: détection de la caspase-3 clivée par IF avec un Ac IIr AlexaFluor 647 nm - clarification 3DISCO


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​Lightsheet.jpg
Équipement et caractéristiques 

UltraMicroscope II La Vision Biotec :

  • 3 diodes laser : 488 nm, 561 nm, 639 nm
  • Caméra sCMOS réfrigérée
  • Objectif à zoom variable Olympus MVX-10 Zoom Body for Ultramicroscope couplé à un objectif fixe Olympus MVPLAPO 2x è soit un grossissement variable de x1.26 à x12.6

Logiciel ImSpector Pro



  • Le système est idéal pour imager des échantillons biologiques de quelques millimètres jusqu’à 1 centimètre de diamètre. La distance de travail en Z est toutefois limitée à 5.6 mm avec l’objectif actuel.
  • Les échantillons peuvent être clarifiés aussi bien par des techniques utilisant des solvants organiques (3DISCO, iDISCO, ECI, BABB…), des milieux aqueux (CUBIC, SeeDB, ClearSee…) ou une inclusion en hydrogel (CLARITY, PACT…). Dans le cas d’une clarification en solvants organiques, il sera demandé de transférer l’échantillon en ECI pour l’observation (DBE et BABB proscrits comme milieux d’immersion).
  • Les marquages sont quant eux réalisés par immunofluorescence ou utilisation de colorants chimiques fluorescents en fonction des besoins. Attention, il n’est pas possible d’imager dans le bleu avec ce système (DAPI, HOECHST, AlexaFluor 405…)
  • Le système n’est pas compatible avec l’imagerie d’échantillons vivants.


​Contacts 

Pour en savoir plus, ou pour vous inscrire à une session assistée vous pouvez contacter :

 elise.delage@supbiotech.fr et thomas.lemonnier@supbiotech.fr

Retrouvez également sur le site de la plateforme https://lightsheetbiotech.wordpress.com/ :
  • Des documents utiles présentant de l'appareil, des protocoles de clarification…
  • Des articles qui partagent les dernières réalisations faites grâce à la plateforme
  • Les évènements/symposiums/formations en lien avec la microscopie à feuillet de lumière et la clarification optique des échantillons.

Pour en savoir +

Le laboratoire CellTechs est issu d'un partenariat entre Sup'Biotech et le Service d'Etude des Prions et Des Infections Atypiques (SEPIA).

-> Pour en savoir plus sur Celltechs 

-> Pour en savoir plus sur le SEPIA