La plateforme propose de plus son expertise pour l'élaboration de vecteurs viraux dérivés d'AAV et de lentivirus, leur production et leur caractérisation en vue du développement de modèles pathologiques et de l'évaluation de nouvelles thérapies (thérapies géniques et thérapies cellulaires).

Ces vecteurs viraux permettent le transfert de gène de façon stable ou transitoire in vitro dans des lignées cellulaires ou des cultures primaires et in vivo chez le rongeur ou le primate non humain. Ils peuvent être utilisés pour sur-exprimer un gène d'intérêt, inhiber l'expression d'un gène endogène (shRNA, CRISPR-Cas9), ou exprimer un gène rapporteur.

Activités

• Construction et production de vecteurs viraux (lentivirus et AAV). Le contrôle qualité des vecteurs inclut la titration par QPCR ou ELISA, tests de pureté protéique et de stérilité.  Après administration in vivo l'évaluation de la biodistribution et de l'effet biologique de ces vecteurs est ensuite prise en charge principalement par la plateforme d'histologie mais également par la plateforme d'imagerie (imagerie TEP) et la plateforme d'analyses comportementales.

• Dosages de biomarqueurs dans des échantillons cérébraux ou extraits de culture cellulaire, modèles de maladies neurodégénératives (qPCR, ddPCR, électrophorèse et western blot, ELISA, mesure d'activités enzymatiques, etc…).
• Cultures cellulaires primaires (de neurones, d'astrocytes ou mixtes) et de lignées. Analyse en vidéomicroscopie, tests de toxicité (MTT, LDH, Calcéine), cytométrie en flux.

​ Laboratoire dédié aux études de biochimie et histologie (© Stroppa/CEA)

Laboratoire de culture cellulaire de biosécurité de niveau 3 (® Stroppa/CEA)

Equipements

• Laboratoire L1 de biologie moléculaire et microbiologie cellulaire dédié au clonage de gènes d'intérêt dans des plasmides d'expression eucaryotes mais aussi à l'étude de l'expression des gènes dans des modèles animaux. En plus de l'équipement classique de microbiologie, le laboratoire L1 est équipé de plusieurs thermocycleurs de qPCR (96 et 384 puits), d'une digital droplet PCR, d'un bioanalyzer et d'un nanodrop
  

• Salles de culture de niveau de biosécurité 2 et 3 équipées (incubateurs, PSM, loupes binoculaires, microscopes inversés à fluorescence dont un système de vidéomicroscopie). Le laboratoire L3 est composé de 10 pièces dédiées à la production et à la manipulation des vecteurs viraux.

• Laboratoire L1 de biochimie dédié à l'analyse des protéines par différentes techniques (Western blot, ELISA, etc…). Il est équipé d'un système de détection de chemiluminescence pour le Western blot (Fusion FX7), de lecteurs de plaques multi-puits pour la mesure de fluorescence, luminescence et absorbance et d'un cytomètre 3 lasers.