​​Les protéines morphogénétiques osseuses (BMPs) et les facteurs de croissance transformants bêta TGFβ jouent un rôle clé dans divers processus physiologiques et pathologiques, comme le développement des organes et les cancers. Le signal biologique induit par ces protéines se traduit par l’expression du facteur pSMAD dans le noyau des cellules. Généralement, cette activation de signal est mesurée par le test de Western blot, qui fournit une information moyenne pour l’ensemble des cellules.

Dans le but de suivre le signal biologique pSMAD pour chaque cellule et pour un grand nombre de conditions, nous avons développé un test basé sur la microscopie de fluorescence. Ce test automatisé permet d’analyser les images des cellules et de quantifier individuellement le facteur pSMAD au sein de chaque cellule.
Le test par immuno-fluorescence répond aux mêmes exigences que celles du test Western blot.

Nous avons réalisé une étude cinétique de l’activité de pSmad en réponse à son activation par les protéines BMP/TGFb, en utilisant des microplaques à 96 puits. Les protéines sont présentées soit directement en solution dans le milieu de culture, soit via un biomatériau déposé au fond de chaque puits.
De plus, nous avons testé des médicaments ciblant le signal biologique induit par les protéines BMP/TGFb.

​ Cette technique d'imagerie pourra être appliquée à l’étude d’autres signaux biologiques au sein des cellules, en réponse à des stimulations par diverses protéines jouant un rôle physiologique ou pathologique.

​​Figure : principe du test.​ © CEA