Les diabètes de type 1 et 2 sont à l'origine de complications chroniques multiples liées à un excès de sucre dans le sang. L'une des complications dont souffrent 15 à 25% des patients diabétiques concerne les ulcérations du pied diabétique (DFU), une maladie liée à un retard de cicatrisation des plaies et des blessures et qui est responsable d'environ 8000 amputations par an en France. Plusieurs études mettent en avant les capacités thérapeutiques des cellules souches dérivées du tissu adipeux (ADSCs) pour aider la cicatrisation en les intégrant par exemple dans des pansements. Au-delà des cellules, les sécrétions des ADSCs elles-mêmes joueraient un rôle clé par leur action dans la cicatrisation, ce qui ouvre des perspectives prometteuses de traitements contre le DFU utilisant le sécrétome seul à partir d'ADSCs. Afin de mieux comprendre l'impact d'un environnement diabétique et DFU sur la cicatrisation, nous avons développé un modèle in vitro de sécrétions diabétiques et de peau reconstruite, dans l'objectif d'identifier les effecteurs négatifs de la cicatrisation. Le travail de thèse s'est déroulé sous 3 axes : (i) réaliser des cultures d'ADSCs de pied du diabétique à partir de cohortes de patients et d'ADSCs non pathologiques, en 2D ou 3D (sphéroïdes) afin d'analyser leur sécrétome différentiel par protéomique; (ii) étudier l'influence des sécrétions d'ADSCs de pied du diabétique sur la migration de fibroblastes et (iii) mesurer l'impact de la nature (pathologique ou non) des ADSCs sur la structure globale de la peau et sur sa vascularisation en les introduisant dans un modèle d'organoïde de peau reconstruite. L'analyse des sécrétions en LC-MS/MS a permis d'identifier plus de 650 protéines dans les sécrétions des ADSCs de patients non pathologiques, obèses, diabétiques et DFU et 4 protéines (HMCN1, COMP, FABP3 et ALPL) impliquées dans la régulation de l'inflammation, le remodelage de la matrice extracellulaire ou la thermogénèse ont été observées comme différentiellement abondantes dans les sécrétions d'ADSCs DFU. La possibilité de concentrer, de stimuler et d'étudier la dynamique temporelle des sécrétions d'ADSCs a été évaluée sur des sphéroides 3D et par microfluidique via un renouvellement permanent du milieu de culture mais n'a pas permis, dans notre configuration d'étude du modèle, de montrer un effet significatif du flux par rapport aux conditions statiques. Le modèle de test de blessure, limité dans notre étude à des fibroblastes primaires, n'a pas permis de montrer un ralentissement significatif de la migration sous l'effet des sécrétions DFU, obèses ou diabétiques. Ce modèle pourrait être complété par d'autres paramètres permettant de suivre la migration et la prolifération des cellules endothéliales et des kératinocytes, la modulation de la réponse immunitaire ainsi que l'action antibactérienne. En revanche, l'effet des ADSCs DFU incorporées dans les modèles de peaux reconstruites est plus visible puisque l'on observe une augmentation du développement du réseau endothélial qui apparait plus dense. Ce projet a permis d'approfondir notre connaissance sur le sécrétome des ADSCs obtenues auprès de patients diabétiques et DFU et pourrait à termes déboucher sur des pistes thérapeutiques d'intérêt pour optimiser la cicatrisation des plaies. ​

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Si vous n'avez pas de badge CEA et que vous souhaitez​ assister à la soutenance, merci de contacter Julie bourget​ au plus tard le 02 juin​

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